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Anforderungshilfen Molekularbiologie

Präanalytik bei molekularbiologischen Verfahren

Die Polymerase-Ketten-Reaktion (PCR) ist eine sehr sensitive Methode, die zur Vermeidung falsch positiver Ergebnisse auf sauber gewonnene und verarbeitete Proben angewiesen ist. Es müssen daher besondere Vorkehrungen bei der Präanalytik getroffen werden. 

Hinweise zur Vermeidung von Kontaminationen

Um Kontaminationen mit Fremd-DNA bzw. -RNA zu vermeiden, sollte die Probenentnahme mit Einmalhandschuhen erfolgen und die Probe (z. B. Blut) in separate, nur für die PCR bestimmte Probengefäße (z. B. EDTA-Röhrchen) eingebracht und gut verschlossen werden. Das erneute Öffnen des Probenröhrchens und ggf. Umfüllen oder Verteilen des Probenmaterials sollten strikt vermieden werden. Lithium-Heparin als Antikoagulans ist nicht geeignet, da es die PCR inhibieren kann und so zu falsch negativen Ergebnissen führt.

Probenmaterial und das korrekte Entnahmesystem

Im Gegensatz zur kulturell mikrobiologischen Untersuchung werden für molekularbiologische Untersuchungen sterile Abstrichtupfer ohne Transportmedium empfohlen. Bei geringer Erregerkonzentration kann es bei Abstrichen in Transportmedien zu falsch negativen Ergebnissen kommen.

Für humangenetische Untersuchungen werden 3 mL EDTA-Blut (kein Heparin) benötigt.

Andere Probenmaterialien wie z. B. Urin, Liquor, Sputum, BAL, Punktate, Sekrete, Fruchtwasser und Aszites sollten in sterile Röhrchen ohne Zusätze überführt und ebenfalls gut verschlossen werden. Gewebeproben (z. B. Biopsien) werden in sterile Röhrchen mit physiologischer Kochsalzlösung überführt und in dieser Form eingesandt. Fixierungslösungen wie Formalin o. ä. können zu DNA-Degradation, PCR-Inhibition und damit zu falsch negativen Ergebnissen führen.

Die quantitative HIV-1 RT-PCR kann nur aus Plasma (nicht aus Serum) durchgeführt werden. Wir benötigen für die Untersuchung 10 mL EDTA-Blut.  

Mycobacterium tuberculosis ist im Liquor nur in geringer Zahl zu erwarten. Aus diesem Grund werden 3 mL Liquor für die Untersuchung benötigt.

 

Chlamydia trachomatis ist ein intrazellulärer Erreger. Bei Verdacht auf genitale Infektion bzw. Konjunktivitis wird zellhaltiges Material wie ein endozervikaler oder Urethralabstrich, Erststrahlurin bzw. Bindehautabstrich benötigt.

Transportbedingungen

Die Proben müssen nicht gekühlt verschickt werden. Bis zum Versand kann das Probenmaterial im Kühlschrank bei 2-8°C gelagert werden. Wiederholtes Einfrieren/Auftauen sollte vermieden werden.


Molekularbiologische Infektionsdiagnostik

Qualitativer/quantitativer Nachweis von Krankheitserregern mittels innovativer PCR- und Sequenzier-Verfahren

Innovative molekularbiologische PCR- und Sequenzier-Verfahren ermöglichen heutzutage einen äußerst schnellen, sensitiven und spezifischen, qualitativen oder auch quantitativen Nachweis von Krankheitserregern in Patientenproben. Im Folgenden sollen einige wichtige Anwendungsbereiche exemplarisch beschrieben werden.

Nachweis von Hepatitis-B-Virus (HBV) DNA (Viruslast) und HBV-Resistenzbestimmung

IndikationUntersuchungsmaterial
Infektionsnachweis bei unklarer Serologie oder Verdacht auf akute InfektionEDTA- bzw. Vollblut
InfektiositätsbestimmungEDTA- bzw. Vollblut
TherapiemonitoringEDTA- bzw. Vollblut
Verdacht auf Resistenzentwicklung, TherapieversagenEDTA- bzw. Vollblut

Nachweis von Hepatitis-C-Virus (HCV) RNA (Viruslast) und HCV Genotypisierung

IndikationUntersuchungsmaterial
Infektionsnachweis bei unklarer Serologie oder Verdacht auf akute InfektionEDTA- bzw. Vollblut
InfektiositätsbestimmungEDTA- bzw. Vollblut
TherapiemonitoringEDTA- bzw. Vollblut
Genotypisierung
(prädiktiver Marker, da antivirale Therapie Genotyp-abhängig)
EDTA- bzw. Vollblut

Nachweis von humaner Immundefizienzvirus Typ 1 (HIV-1) RNA (Viruslast) und HIV-1 Resistenzbestimmung

IndikationUntersuchungsmaterial
Abklärung unklarer SerologieEDTA-Blut
Verdacht auf frische HIV-Infektion (serologisch diagnostisches Fenster)EDTA-Blut
TherapiemonitoringEDTA-Blut
Verdacht auf Resistenzentwicklung, TherapieversagenEDTA-Blut
Neurologische Symptomatik, HIV-Enzephalopathie (Neuro-AIDS)Liquor, EDTA-Blut

Nachweis von Herpes simplex-Virus Typ 1 und Typ 2 (HSV-1, HSV2) DNA

IndikationUntersuchungsmaterial
Enzephalitis, MeningitisLiquor, EDTA-Blut, Serum
Retinitis, KonjunktivitisKammerwasser
Generalisierte HSV-InfektionEDTA-Blut, Serum
Abklärung einer floriden HSV-InfektionAbstrich
Herpes neonatorumLiquor, EDTA-Blut, Serum, Abstrich

Nachweis von Varizella-Zoster-Virus (VZV) DNA

IndikationUntersuchungsmaterial
EnzephalitisLiquor, EDTA-Blut, Serum
PneumonieBAL, EDTA-Blut
Hämorrhagische WindpockenAbtstrich, Biopsie, EDTA-Blut
Abklärung einer floriden VZV-InfektionAbstrich
Zoster neonatorum und Zoster generalisatusAbstrich, EDTA-Blut, Serum

Nachweis von Chlamydia trachomatis DNA

IndikationUntersuchungsmaterial
Urogenitale Infektionendozervikaler/Urethralabstrich, Erststrahlurin, Sperma
KonjunktivitisBindehautabstrich
Reaktive ArthritisGelenkpunktat
Screening für asymptomatische Risiko-PersonenErststrahlurin
Therapiekontrollesiehe Indikation

Nachweis von Mycobacterium tuberculosis Komplex DNA

IndikationUntersuchungsmaterial
bei Verdacht auf TuberkuloseSputum, BAL, Bronchialsekret, Magensaft, Liquor, Urin, Punktat

Nachweis von humaner Papillomavirus (HPV) DNA

IndikationUntersuchungsmaterial
Gynäkologische VorsorgeuntersuchungUrogenitalabstrich
Abklärung unklarer zytologischer Befunde, grenzwertiger zytologischer Auffälligkeiten oder leichter DysplasienUrogenitalabstrich, Zervixbiopsie
Nachweis der Viruseliminierung nach BehandlungUrogenitalabstrich

Nachweis von Bordetella pertussis/parapertussis DNA

IndikationUntersuchungsmaterial
Atemwegsinfektion, paroxysmaler Husten, prolongierter Husten (Erwachsene), Apnoe (Säuglinge)Abstrich nasopharyngeal (bevorzugt) oder pharyngeal, Trachealsekret, BAL, Sputum

Nachweis von Influenza A/B RNA

IndikationUntersuchungsmaterial
Bei Verdacht auf Influenza (Grippe)Abstrich nasopharyngeal (bevorzugt) oder pharyngeal

Nachweis von Mycoplasma pneumoniae DNA

IndikationUntersuchungsmaterial
Atemwegsinfektion: Pharyngitis, Tracheobronchitis, atypische PneumonieAbstrich nasopharyngeal (bevorzugt) oder pharyngeal, Trachealsekret, BAL, Sputum

Nachweis sexuell übertragbarer Erkrankungen (Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, Ureaplasma parvum oder Ureaplasma urealyticum)

IndikationUntersuchungsmaterial
Verdacht auf Infektion mit Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, Ureaplasma parvum oder Ureaplasma urealyticumUrin
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